Base蛋白纯化仪操作全解析，从样品上样到目标蛋白收获的标准化流程指南

更新时间：2025-08-26

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　　在生物制药与生命科学研究中，蛋白纯化是获取高活性目标产物的核心环节。Base蛋白纯化仪凭借其智能化控制系统与模块化设计，成为实验室高效分离蛋白的得力工具。本文将系统梳理其标准化操作流程，助您快速掌握从样品准备到蛋白收集的全链条技术要点。

　　一、预处理阶段：构建纯净的分离起点

　　1.样品澄清处理

　　将细胞裂解液或发酵液以12,000×g离心30分钟，去除细胞碎片与沉淀。对于膜蛋白等难溶目标物，可添加0.5% Triton X-100辅助溶解，同时需通过0.22μm滤膜过滤，防止颗粒物堵塞层析柱。

　　2.缓冲液配制验证

　　根据目标蛋白等电点（pI）选择离子交换层析模式：若pI<7，优先采用阴离子交换（Q柱）；若pI>7，则选用阳离子交换（SP柱）。使用pH计与电导率仪双重校准缓冲液，确保pH偏差≤±0.1，电导率波动<5%。

　　二、仪器设置：精准调控分离参数

　　1.系统初始化校准

　　启动Base软件后，依次执行泵流速校准、紫外检测器波长验证及压力传感器归零操作，确保基线稳定性≤±0.5mAU。

　　2.层析柱平衡程序

　　设置平衡缓冲液（Buffer A）流速为柱体积的1/10，持续冲洗3-5个柱体积，直至电导率与pH值稳定。此阶段需密切观察压力变化，若超过0.3MPa需立即停泵检查。

　　三、分离纯化：动态优化目标蛋白回收

　　1.梯度洗脱策略

　　对于离子交换层析，采用线性梯度洗脱，梯度时间设定为10-15个柱体积。若目标蛋白与杂质分离度不足，可切换为阶梯式洗脱。

　　2.实时监测与分步收集

　　通过软件设置紫外吸收阈值（通常为50mAU），当洗脱峰超过阈值时自动触发分步收集。对于疏水相互作用层析（HIC），建议在峰顶出现后延长收集时间2个柱体积，确保目标蛋白全部洗脱。

　　四、后处理与维护：保障设备长效运行

　　1.层析柱再生处理

　　纯化结束后，依次用2M NaCl（高盐冲洗）、0.1M NaOH（碱洗）与去离子水（中和）各冲洗2个柱体积，最后以20%乙醇保存。定期使用SDS-PAGE检测柱效，当分辨率下降15%时需进行再生或更换。

　　2.系统清洗消毒

　　拆卸层析柱后，用1M NaOH循环清洗管路30分钟，随后以去离子水冲洗至pH中性。对于核酸污染风险高的样品，可增加0.1% DEPC处理步骤，灭活RNA酶活性。

　　结语

　　Base蛋白纯化仪的操作精髓在于"预处理精细化、参数动态化、维护周期化"。通过严格执行上述流程，实验室可实现目标蛋白纯度>95%、回收率>80%的稳定产出，为结构生物学研究、抗体药物开发等高级应用提供可靠保障。